[toc]
##基因工程的基本程序

1. 目的基因的获取
2. 基因表达载体的构建
3. 将目的基因导入受体细胞
4. 目的基因的检测与鉴定

##获取目的基因的三个途径

1. 从基因文库中获取
2. 通过 PCR 扩增
3. 人工合成目的基因

##基因表达载体的组成

• 启动子
• 终止子
• 目的基因
• 标记基因

##构建表达载体需要什么酶

1. 限制酶
2. DNA连接酶

##将目的基因导入植物/动物/微生物细胞的方法

1. 导入植物细胞
   1. 农杆菌转化法
   2. 基因枪法
   3. 花粉管通道法
2. 导入动物细胞
   显微注射技术
3. 导入微生物细胞
   钙离子处理法

##目的基因检测在什么水平
分子水平
##目的基因检测的内容，方法，工具，现象

内容	方法	检测工具	现象
是否插入目的基因	DNA分子杂交	基因探针：用含放射性同位素标记的目的基因做探针	杂交带
同位素标记的目的基因做探针	分子杂交	基因探针	杂交带
是否转录出mRNA	抗原-抗体杂交	用相应的抗体	杂交带

##载体需要必备的条件

1. 能在效体细胞中稳定保存及复制
   1. 自我复制
   2. 整合到宿主细胞染色体 DNA 上复制
2. 具有一个至多个限制酶切点，以便与目的基因链接
3. 具有某些标记基因，以便筛选含目的基因的受体细胞
   1. 某些抗生素抗性的基因
   2. 合成颜色的产物的基因
4. 对受体细胞无害
5. 大小合适，便于操作

##限制酶的特点，切割什么键

1. 特点
   1. 识别双链 DNA 分子中特定的核苷酸序列（不能识别 RNA 分子）[多数是六个]
   2. 在特定的位点上进行切割
2. 切割磷酸二酯键

##DNA连接酶的种类及作用

1. 种类：按来源分为
   1. E·coli DNA 连接酶
      只能连接粘性末端
   2. T₄DNA 连接酶
      能连接粘性末端和平末端
      效率极低