基因工程的工具？四个步骤？核心？原理？

原理：基因重组
工具
1. 限制酶
2. DNA 连接酶
3. 载体
步骤
1. 目的基因的获取
2. 基因表达载体的构建（核心）
3. 将目的基因导入受体细胞
4. 目的基因的检测与鉴定

限制酶的作用？其识别的序列有何特点？切割什么键？

作用：切割磷酸二酯键
被识别序列特点：具有回文序列

DNA连接酶的种类？连接什么键？

种类：按来源分为

1. E·coli DNA 连接酶 只能连接粘性末端
2. T₄DNA 连接酶 能连接粘性末端和平末端 效率极低

连接两个 DNA 片段之间的磷酸二酯键

最常见的载体是？其本质？标记基因的作用？

最常见的载体：质粒
本质：独立于细胞拟核 DNA 外能自我复制的小型环状 DNA

##获取目的基因的途径？

1. 从基因文库中获取
2. 通过 PCR 扩增
3. 人工合成目的基因

基因文库的分类？

• 基因组文库——全部基因
• 部分基因文库——部分基因，如 cDNA 文库

构建基因表达载体需要什么酶？

1. 限制酶
2. DNA连接酶

表达载体的组成？

• 启动子
• 终止子
• 目的基因
• 标记基因

启动子的作用？

调控基因的转录

PCR扩增的条件？过程？

1. 条件： 模版DNA 引物 原料(d_TP) Taq酶（热稳定DNA聚合酶，耐高温）
2. 步骤

受热变性 -->	冷却复性 -->	延伸 -->	...重复
(90-95℃)	(55-60℃)	(70-75℃)
氢键打开	引物结合到模板链	子链5’端->3’端

如何制备引物？

用一段已知目的基因的核苷酸序列合成引物